甘肃省临床检验质量管理年会【百日咳再现及危害】

      会上，甘肃省领军人才、庆阳市人民医院主任检验师侯娟娟主任为我们分享了【百日咳: 被忽略下的悄然复现】主题。

百日咳是由百日咳鲍特杆菌引起的急性呼吸道传染病，主要通过飞沫传播，传染性强。最新的临床症状为慢性咳嗽，如未得到及时有效治疗，病程可达数个月。且有较严重的并发症，如肺炎、百日咳脑病、心血管系统障碍、营养不良等。“百日咳再现”在我国已经出现，在百日咳疫情高发的同时其流行病学特征发生改变，高危人群和传播模式已经与传统百日咳相差甚远。

百日咳再现及危害

      根据国家卫生计生委疾病预防控制局公布的疫情报告显示，2014-2018年，我国百日咳发病率逐年升高，在新生儿广泛常规接种百白破疫苗的情况下，发病率依然从2014年的0.5/105暴涨到2018年的1.6/105。此外我国百日咳还呈现年长儿和成人的发病率上升，成为主要传染源、出现局部地区爆发、出现新临床特征等情况，2005-2014年天津诊断百日咳病例882例，其中成年人252例，占发病人数的28.57%。2005-2008年无成年人病例的报告；2009年为5.26%；随后逐年增加，到2013年发病率达到最高的44.09%。后五年成年人发病构成比前五年上升了26倍。发病人群年龄分布中，21-30年龄段占比最高，为36.12%。

*中国2011_2017年百日咳流行病学特征分析. 中国疫苗和免疫. 2018

      我国正面临着“百日咳再现”问题的严峻考验，近年来国内一些省份也陆续出现百日咳疫情大幅上升，引起各方高度关注，百日咳现已经成为临床医师广泛关注的传染性疾病。百日咳鲍特杆菌引起的早期呼吸道感染症状在临床表现方面与其他呼吸道病原体引起的呼吸道疾病较为类似，因此需要有效的诊断方法能快速地鉴定百日咳鲍特杆菌，有助于流行病学现场处置。

      目前临床上常用细菌培养和血清学筛查等方法对百日咳杆菌进行检测，但百日咳杆菌分离培养难度大，培养周期长，而血清学筛查存在灵敏性低，特异性不高的缺陷，限制了上述两种百日咳杆菌检测方法在临床上的应用。

本项目通过核酸检测的方法快速地鉴定样本中的百日咳鲍特杆菌，是《中国儿童百日咳诊断及治疗建议》中推荐的百日咳杆菌的有效诊断方法，有助于实现精准诊断，为后续的药物治疗提供诊断依据指导精准用药，并且有利于流行病学的处置。

《中国儿童百日咳诊断及治疗建议》中指出的百日咳的临床诊断标准和实验室诊断标准：

IS481引物

无法特异性检测百日咳

亿立方应用生物信息学方法

设计出特异针对百日咳的引物

      ①应用生物信息学方法服务器计算，对比NCBI数据库中所有2万多条百日咳序列设计引物探针，100%匹配能检出。传统引物设计选择有限的代表序列，包容性和特异性不足。

      ②所选择的检测靶标为高拷贝数靶标（其在百日咳基因组中的拷贝数为15-18个），提高了检测的灵敏度，最低检测限达到200 copies/mL。

百日咳核酸检测的必要性

      百日咳是一种可以治愈的疾病,患者的预后通常较好。然而,准确的病情诊断是控制百日咳传播的关键,特别是疾病早期的判断。百日咳的实验室检测易受标本采集、采样时间、疫苗接种史和抗生素使用等因素的影响,百日咳杆菌难以培养且培养周期较长,血清学检测的灵敏度和特异性也不高。相比之下,聚合酶链式反应(PCR)技术作为诊断百日咳感染的敏感方法,可以实现疾病的及早发现、诊断和治疗,显著提高患者的生活质量。

      深圳市亿立方生物技术有限公司的百日咳杆菌核酸检测试剂盒具有更高的灵敏性，理论上能检测出一个拷贝的病原体，更适合于早期病程患儿病情诊断；针对百日咳特异性序列设计引物探针，与血清学检验所用的抗原片段相比，具有更高的特异性，能提高检测的特异性；可扩大检测人群范围，对免疫缺陷者的检测成为可能。血清学筛查存在灵敏性低，特异性不高的缺陷，百日咳杆菌核酸检测更适用于临床大规模筛查。

      该产品适用于检测人口咽拭子或鼻咽拭子样本中的百日咳杆菌DNA，是全国首个获批第三类医疗器械注册证的产品，目前已广泛应用于全国各大医院。

      采用临床广为接受并且稳定实时荧光PCR技术，以百日咳杆菌基因组DNA高度保守区为靶区域进行基因检测，反应体系灵活多变，检测不受样本数量的限制，可同时完成多个样本检测，操作简单，检测试剂中包含核酸提取试剂，核酸提取后进行PCR反应，PCR反应体系中含有dU-UNG酶防污染体系和阴阳质控品，以避免假阳性和假阴性结果。

百日咳多中心

      我国人口基数大，百日咳实际发病数远高于报告数，且公共卫生意识不足，成人感染不重视且没有成人疫苗，为进一步完善、规范、和解决百日咳患者临床实验室诊断中的难点问题，提高医疗保健机构百日咳诊疗能力，保障人民生命健康，根据中国妇幼保健院协会《关于发布“百日咳杆菌核酸检测在妇儿领域应用的多中心研究”项目研究方案的通知》（中妇幼便函[2021]281号）文件要求。

      亿立方将不断凭借自身的优势，继续做敢于开拓创新、有责任担当的高新技术企业，为落实健康中国建设添砖加瓦。

      亿立方人定会不负期待，继续以自我创新为核心推动力，努力进取，力争做分子诊断先进技术的领军企业。